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Quick Cell 發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2017/11/16      點(diǎn)擊次數(shù):1985

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Quick Cell 發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

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價(jià)格(元)

Quick Cell 發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒

C4056L1062

50 T

-80℃

1250

產(chǎn)品描述

《Quick Cell發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒》通過(guò)檢測(cè)支原體的特異性酶活性以達(dá)到檢測(cè)體外培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞是否被支原體污染的目的。在支原體裂解后,該支原體特異性的酶,在底物存在下,具有將ADP轉(zhuǎn)化成ATP的功能。由于熒光素酶(Luciferase)催化底物熒光素(Luciferin)產(chǎn)生光的反應(yīng)需要ATP的參與,支原體特異性酶催化產(chǎn)生的ATP含量,可以通過(guò)該反應(yīng)轉(zhuǎn)化成生物發(fā)光(Bioluminescence)信號(hào),該信號(hào)可以使用專門(mén)的發(fā)光檢測(cè)儀(Luminometer)或具有發(fā)光檢測(cè)功能的多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè),發(fā)光的強(qiáng)度與ATP的含量成正比。通過(guò)比較細(xì)胞培養(yǎng)上清和未用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液上清二者的支原體特異性酶的含量,即可知道培養(yǎng)的細(xì)胞是否被支原體污染。反應(yīng)原理如下:

使用方法

1、檢測(cè)試劑的準(zhǔn)備

產(chǎn)品從-80 ℃冰箱取出,在冰上操作,*次使用,分別用2.5 mL支原體檢測(cè)溶液溶解試劑A和試劑B, 按每管50 μL可分別分裝到50個(gè)1.5 mL離心管中,根據(jù)待檢測(cè)的樣品數(shù)量及陰性對(duì)照數(shù)量確定A,B試劑的用量(不用的試劑放置于-80 ℃冰箱低溫保存,隨用隨?。?。試劑A和試劑B,放室溫5分鐘左右(注意:不能加熱),等其熔解后放冰上待用。

注意:試劑A和試劑B只能在每次檢測(cè)之前從-80 ℃冰箱取出的,熔解后在室溫放置的時(shí)間盡可能的短,不能超過(guò)20分鐘。熔解后,放冰上的時(shí)間也不能超2小時(shí)。已經(jīng)融化后的試劑A和試劑B不能再次凍存使用。

2、陰性對(duì)照的設(shè)置

本試劑盒每次檢測(cè)都必須設(shè)置陰性對(duì)照。陰性對(duì)照除了沒(méi)有培養(yǎng)細(xì)胞外其他成分*相同,包括其中的血清批次、含量,抗生素等含量也必須*相同。陰性對(duì)照配制完后放于4℃冰箱。

3、待測(cè)樣品的準(zhǔn)備

為了準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否有支原體的污染,。具體操作如下(請(qǐng)嚴(yán)格按照相應(yīng)的體積進(jìn)行操作):

(1)貼壁細(xì)胞待測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)3天且匯合度在70-90%左右時(shí),取180 μL培養(yǎng)液上清上,在普通臺(tái)式離心機(jī)上200 g (大約1500 rpm )低速離心5 分鐘,準(zhǔn)確吸取離心后的上清120 μL到一個(gè)新的1.5 mL離心管內(nèi),丟棄含細(xì)胞沉淀的原有離心管。

懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞需要在換液傳代后,至少讓細(xì)胞生長(zhǎng)3天再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)。

注意:離心力要嚴(yán)格控制在200 g左右,該離心力下,哺乳動(dòng)物細(xì)胞將被沉淀下來(lái)而支原體不會(huì)。更高的離心力將可能導(dǎo)致支原體也被離心下來(lái),從而導(dǎo)致假陰性。而更低的離心力將可能導(dǎo)致哺乳動(dòng)物細(xì)胞不能被離心沉淀下來(lái),從而導(dǎo)致支原體經(jīng)測(cè)時(shí),哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的ATP也被釋放到溶液中,從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。

(2)將含有120 μL上清的1.5 mL離心管,在臺(tái)式離心機(jī)上16000 g (大約13000 rpm)高速離心3 分鐘,棄去上清(約108 μL)注意:切勿讓吸頭碰到離心管底部,底部為可能含有支原體的沉淀。往離心管內(nèi),加入108 μ*期配好的陰性對(duì)照培養(yǎng)液,并上下吹吸10次,將可能含有支原體的沉淀吹打均勻。該樣品用于后續(xù)的支原體檢測(cè)。

注意:將培養(yǎng)液替換成陰性對(duì)照的培養(yǎng)液是為了排除一些細(xì)胞代謝產(chǎn)物對(duì)后續(xù)檢測(cè)的可能干擾。

5、將熔解后的試劑A、試劑B、陰性對(duì)照和待測(cè)樣品放在室溫10分鐘左右(注意:不能加熱),以便其溫度與室溫相同,本試劑盒的*反應(yīng)溫度為18-30℃,必須確保室溫不低于15℃。

注意:制備好的待測(cè)樣品如果不是當(dāng)天立即檢測(cè),放于-80℃冰箱保存,不得放于室溫、4 ℃或-20 ℃冰箱,樣品在-80℃可以保存一年左右;為了日后檢測(cè)方便,應(yīng)該同時(shí)凍存一些作為陰性對(duì)照的培養(yǎng)液。

6、吸取50 μL陰性對(duì)照和待測(cè)樣品,分別放入不透明(白色或者黑色均可)的96孔板內(nèi),加入50 μL試劑A,室溫反應(yīng)15分鐘。

7、加入50 μL試劑B,室溫反應(yīng)3分鐘后,在多功能酶標(biāo)儀或者發(fā)光檢測(cè)儀(Luminometer)上,以儀器默認(rèn)的參數(shù)進(jìn)行發(fā)光值的檢測(cè),5分鐘內(nèi),連續(xù)測(cè)5次陰性對(duì)照和待測(cè)樣品的發(fā)光值,計(jì)算各自的平均值。

8、結(jié)果判斷

計(jì)算待測(cè)樣品的發(fā)光平均值與陰性對(duì)照的發(fā)光平均值的比值:

 如果比值>1.2,說(shuō)明待測(cè)樣品有支原體污染(陽(yáng)性)。嚴(yán)重的污染該比值可以達(dá)到10以上。

 如果比值在1.1-1.2之間,說(shuō)明待測(cè)樣品可疑有支原體污染(可疑陽(yáng)性)。該樣品需要繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)后,重新檢測(cè)。如果繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)后,重新檢測(cè)的比值仍然在1.1-1.2之間,應(yīng)該判為陰性。

 ③如果比值<1.1,說(shuō)明待測(cè)樣品無(wú)支原體污染(陰性)。

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

保存

價(jià)格(元)

Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))

C4056L1060

50 T

-20℃

1250

Quick Cell 發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒

C4056L1062

50 T

-20℃

1250

Quick Cell PCR法支原體檢測(cè)試劑盒

C4056L1064

100 T

-20℃

1350

Quick Cell支原體去除/預(yù)防試劑盒

C4056L1066

2ml

-20℃

1200

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