胎牛血清(FetalBovineSerum,簡稱FBS)是一種常用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清,胎牛血清富含多種生物活性成分,包括生長因子、激素、營養(yǎng)物質(zhì)等。這些成分對于細(xì)胞生長、分化和代謝具有重要作用。在細(xì)胞培養(yǎng)中,胎牛血清通常被用作培養(yǎng)基的添加劑,以提供細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子。...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類:化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒有一種方法是放之四海而皆準(zhǔn)的,即沒有任何方法適用于所有細(xì)胞和所有實驗。因而只有依據(jù)自己的實驗要求選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實驗結(jié)果。下面介紹幾種常見的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法:1、DEAE-右旋糖苷法常言道:同性相斥,異性相吸。因而,當(dāng)帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負(fù)電的磷酸骨架相遇,妥妥的火花四射,而后會被細(xì)胞膜抱團相擁并通過細(xì)胞內(nèi)吞作用迎客到家。該法可用于瞬時轉(zhuǎn)染,操作相對簡單、結(jié)果可重復(fù),但是對細(xì)胞有一定的毒副作...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染指的是將外源分子如DNA、RNA等導(dǎo)入到真核細(xì)胞內(nèi)部的技術(shù)。隨著基因和蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實驗中常用的技術(shù)手段之一。對于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗,轉(zhuǎn)染試劑、轉(zhuǎn)染方法、細(xì)胞狀態(tài)等都會影響到細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率,本文主要對影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的8個因素做一介紹。1.轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可以選擇不同的轉(zhuǎn)染試劑,轉(zhuǎn)染試劑的選擇又可以根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的文獻(xiàn),已經(jīng)有很多細(xì)胞株被成功轉(zhuǎn)染,通過文獻(xiàn)資料可以參考最適的轉(zhuǎn)染試劑,當(dāng)然也要根據(jù)不同的實驗需求選擇。一般來說轉(zhuǎn)染試劑的要求是低毒,...
1、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。2、血清中包含絮狀...
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍;化學(xué)介導(dǎo)方法:如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù);生物介導(dǎo)方法:有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對細(xì)胞類型有很強的選擇性,在一般實驗室中很難普及。其它物理和化...
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透...
原代細(xì)胞(primaryculturecell)是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)...
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